DNA hybridizační test firmy GenID GmbH - HPV-screening: Detection and Differentiation of Human Papilloma Virus (HPV)

Princip metody:

Set HPV-screening vyráběný firmou GenID GmbH a distribuovaný v ČR firmou Genetica je určený pro detekci lidských papillomavirů (HPV) ve stěrech z hrdla děložního a bioptickém materiálu a základní rozlišení HPV na nízko-rizikové typy HPV a vysoko-rizikové typy HPV. Test má detekovat 24 typů HPV: 6 nízko-rizikových (LR HPV 6, 11, 40, 42, 43, 44) a 18 vysoko-rizikových (HR HPV 16, 18, 31, 33, 34, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73 a 82) typů. HPV-screening je test založený na amplifikaci fragmentu z vysoce konzervované oblasti L1 genu HPV za použití primerů značených biotinem. Produkt této reakce je následně použit k obrácené hybridizaci, při které je próba specifická pro HPV obecně a pro skupinu HR a LR HPV pevně ukotvená na membránové stripy. Kontrolním genem amplifikace je gen pro GAPDH. PCR produkt specificky navázaný na specifickou próbu je detekován přes biotin streptavidin-konjugovanou protilátkou a následně barevnou reakcí.

Obr.: Možnosti výsledků a jejich interpretace

Hodnocení NRL:

Testování setu HPV-screening v naší laboratoři ukázalo jeho velké nedostatky. Nejzávažnějším nedostatkem je jeho specifita. Dochází k pozitivní reakci s HR HPV próbou u LR klonů, k falešně pozitivní reakci u negativních kontrol a falešně negativní reakci u DNA klonů, jejichž průkaz by set měl provádět. Závažným nedostatkem je i citlivost setu (>1000 kopií virového genomu na reakci). K provedení setu máme i formální výhrady (nedostatky v návodu jak anglickém, tak českém), malá množství jednotlivých složek kitu. Doporučená teplota nasedání primerů se liší v návodu výrobce a distributora. Vzhledem k tomu, že nám byl dodán pouze jeden kit (12 vzorků), omezili jsme se na nejzákladnější testování. Ve stávající podobě však nelze tento set doporučit pro distribuci v ČR.

Obr.: Výsledky detekce HPV DNA

Legenda:

Firma GeneTica (zastupuje firmu Symbiosis) dále nabízí další kity pro detekci HPV:

• PCR , RFLP- (HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33, 53, 56,58, 59, 61)
• PCR, EIA Quanti-Kin (HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33)