Oddělení HLA

Pracoviště je začleněno v Komplementu laboratoří ÚHKT. Kontinuálně obhajuje nezávislé a nestranné posouzení odborné způsobilosti Komplementu laboratoří podle normy ČSN EN ISO 15189, jejíž aplikaci ověřuje Český institut pro akreditaci. Vyšetřovací metody v rozsahu akreditace jsou definovány přílohou Osvědčení o akreditaci v aktuální verzi, ta je dostupná na webových stránkách ÚHKT.

Oddělení HLA provádí specializovaná genetická vyšetření pacientů a dárců hematopoetických kmenových buněk a dále vyšetřuje vzorky pacientů s podezřením na vrozenou HLA predispozici k chorobám např. typu celiakie. Všechna vyšetření jsou prováděna metodami molekulární genetiky.

Při vyšetření pacientů a při vyhledávání vhodných dárců hematopoetických kmenových buněk dárců testuje hlavní imunitní systém člověka – HLA (Human Leukocyte Antigens) na úrovni vysokého rozlišení s využitím metody masivně paralelního sekvenování. Dále jsou pro tyto účely testovány také KIR geny (killer cell immunoglobulin-like receptors).

V rámci testování vazby HLA s chorobami, především HLA geny spojené s rizikem celiakie, oddělení pracuje jako referenční pracoviště a zajišťuje a koordinuje výměnu informací s ostatními DNA laboratořemi v ČR. Dále poskytuje konzultační služby a organizuje mezilaboratorní porovnávání zkoušek.

Od roku 2007 je oddělení akreditováno u mezinárodní odborné organizace European Federation for Immunogenetics. V rámci této organizace se pravidelně úspěšně zúčastňujeme mezinárodních kontrol kvality práce pro všechna prováděná vyšetření. Oddělení HLA je součástí NRL pro DNA diagnostiku.

Pracovníci jsou vázáni mlčenlivostí dle Zákona o zdravotních službách, 372/2011 Sb.

Důvěra a vysoké zabezpečení údajů je jednou ze základních priorit v rámci činnosti Komplementu laboratoří ÚHKT. Zavedené postupy probíhají v souladu se Zákonem o zpracování osobních údajů 110/2019 Sb., a nařízením Evropského parlamentu a Rady EU 2016/679, ze dne 27. dubna 2016 o ochraně fyzických osob v souvislosti se zpracováním osobních údajů a o volném pohybu těchto údajů a o zrušení směrnice 95/46/ES. Více informací je dostupných na webových stránkách ÚHKT.

Genotypizaci HLA systému provádí oddělení HLA od roku 1993 jako první v České republice a to pro potřeby pacientů ÚHKT, Kliniky dětské hematologie a onkologie FN Motol a dalších klinických zadavatelů.

HLA systém (Human Leukocyte System) je hlavní histokompatibilitní systém člověka. Geneticky se mapuje na krátké raménko 6. chromosomu (do polohy 6p21.31. - 6p21.33). Produkty jeho enormně polymorfních genů (jedná se o řádově stovky alel, ale konečné počty nebyly dosud stanoveny) jsou antigenní struktury (transmembránové glykoproteiny), které rozpoznávají organismu cizí struktury a tím zahajují kaskádu imunitních odpovědí.

Určení přesného genotypu HLA u pacienta a jeho dárce je jednou ze základních podmínek pro úspěšnost allogenní transplantace hematopoetických kmenových buněk. Neshoda v HLA oblasti mezi dárcem a příjemcem transplantátu může navodit odhojení tohoto štěpu, popřípadě způsobit nemoc štěpu proti hostiteli GvHD (Graft Versus Host Disease), která je vážnou, popřípadě fatální komplikací.

V současné době provádíme rutinně genotypizaci nejdůležitějších transplantačních lokusů HLA I. a II. třídy: HLA -A, -B, -C, -DRB1, -DQB1 u pacientů indikovaných k allogenní transplantaci hematopoetických kmenových buněk a jako konfirmační vyšetření pro ně vybraných nepříbuzných dárců z českých i zahraničních registrů.

Je známa také asociace některých onemocnění (např. revmatoidní artritida, coeliakia, narkolepsie, inzulin dependentní diabetes melitus) s konkrétními alelami HLA systému, což se projevuje zvýšením relativního rizika vzniku choroby při přítomnosti dané alely. Žádná z těchto asociací však není absolutní.

Laboratoř stanovuje HLA znaky asociované s chorobami:

HLA-B*27 pozitivitu pro asociaci s revmatoidními onemocněními
HLA-DQB1*06:02 pozitivitu pro stanovení asociace s narkolepsií
HLA –DQB1 a –DQA1 alely asociované s celiakií dle doporučení European Society for Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition Guidelines for the Diagnosis of Coeliac Disease

Pro uvedené HLA znaky laboratoř pořádá pro zájemce každoroční programy MPZ.

Po dohodě provádíme i genotypizaci vybraných lokusů HLA systému jako doplňující informaci pro stanovení diagnózy některých s HLA asociovaných chorob.

Studium HLA systému začíná být i důležitým nástrojem farmakogenetiky, kdy HLA znak může predikovat odpovídavost/neodpovídavost či senzitivitu pacienta na podání léčebného preparátu (např. podání Abacaviru u HIV pozitivních pacientů).

Pro genotypizaci používáme řadu přesných metodik:

polymerázovou řetězovou reakci se sekvenčně specifickým primery (PCR-SSP)
přímé sekvenování (SBT)

Vyhodnocení výsledků je prováděno speciálními softwary, které jsou navázány na mezinárodní databázi HLA alel a jsou v závislosti na této databázi pravidelně aktualizovány. Tím je zajištěna maximální vypovídací schopnost vydávaných výsledků.